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                如何选择正确内参抗体,这些你需知道-北京博奥森生物技术有限公司
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                如何选择正确内参抗体,这些你需知道
                发表者:北京博奥森生物      发表时间:2020-3-13



                内参抗体可用于评价蛋白质免疫印迹法(Western Blot)的效率,比较凝胶中每孔的蛋白上样量。此类对照可帮助确定样品间表达水平的差异,以判断是由细胞裂解物的实际蛋白水平导致,还是由上样量的差异导致。

                内参抗体在目标蛋白的免疫荧光研究中,也可以作为共染的阳性对照。内参抗体分为未标记型和标记型,标记物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。



                内参抗体种类很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、Lamin B、PCNA等,其选择常使我们困惑。本文将简单介绍选择内参抗体应遵循的五项原则:

                一、样本种属来源:

                首先要考虑实验样本来源于什么物种。

                1. 哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。

                2. 植物来源实验样本,则可以选择plant actin、Rubisco等。

                3. 其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。

                二、分子量大小:

                选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小,一般保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。例如,目的蛋白分子量为40KD,此时不适宜选择β-actinGAPDH作为内参,可以考虑选择α-Tubulin或者β-tubulin作为内参。

                三、表达水平

                选择的内参蛋白需要在待测样本中是高表达的。常用的内参蛋白是由管家基因高表达的,是细胞发育和维持细胞活力所必须的。例如,细胞核的内参蛋白 PCNA,在 DNA S 期表达,因此对于非增殖细胞不推荐使用。

                四、目的蛋白表达定位

                适用范围 名称 货号 分子量
                胞质
                beta I Tubulin bsm-33041M 50kDa
                beta Tubulin bsm-33034M 50kDa
                bs-4511R 50kDa
                beta Actin bsm-33036M 42kDa
                bs-0061R 42kDa
                GAPDH bs-10900R 36kDa
                bs-2188R 36kDa
                bsm-0978M 36kDa
                bsm-33033M 36kDa

                alpha Tubunlin

                bs-20496R 50kDa
                bs-0159R 50kDa
                Vinculin bsm-54148R 117kDa
                Cyclophilin B bsm-33228M 20kDa
                bsm-52473R 20kDa
                核蛋白
                Histone H3 bs-0349R 15-17kDa
                bsm-33042M 15-17kDa
                Lamin B bs-23709R 66-72kDa
                bsm-33040M 66-72kDa
                PCNA bs-0754R 36kDa
                bsm-52347R 36kDa
                bsm-33035M 36kDa
                TATA binding protein TBP/TBP bsm-33227M 38kDa
                YY1 bsm-52349R 46kDa
                HDAC1 bs-1414R 65kDa
                bsm-52080R 65kDa
                膜蛋白
                ATPase Na+/ K+ beta 2 (ATPB2) bs-1152R 33kDa
                bs-23414R 33kDa
                质膜
                ATP1A1 (Sodium Potassium ATPase) bs-4255R 97-110kDa
                bsm-52485R 97-110kDa
                线粒体
                COX4 bsm-33037M 17kDa
                VDAC1 bs-1461R 32kDa
                bsm-52251R 32kDa
                全血/血浆/血清
                Transferrin bsm-33243M 77kDa
                bs-2052R 77kDa
                Albumin bsm-0945M 66kDa
                bs-0945R 66kDa
                细胞增殖标志物
                BrdU bsm-0917M 化合物
                bs-0489R 化合物
                植物内参 Plant actin bsm-33128M 42kDa
                详细 精品内参抗体列表 点击此处下载


                五、表达因素

                选择蛋白表达不受实验变量影响的内参

                在做多组织多细胞样本对比表达量时,最好选用 GAPDH作为内参,因为GAPDH是代谢类蛋白,在活组织中表达比较恒定。而β-Actin和β-Tubulin是结构蛋白,不同组织的细胞结构会有差异性;

                而在某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参;

                涉及细胞增殖的相关试验中,c-Jun由于自身表达变化不适合做内参;

                凋亡实验时,TBP、Lamin等也不适合作为内参;

                做诱导后样本或检测磷酸化等修饰性抗体时,应选择结构蛋白作为内参,如β-Actin 和β-Tubulin;

                做各种分泌液样本的时候,如血浆、乳汁、组织液等,由于没有完整的细胞结构,只能选择一些分泌蛋白作为内参。



                内参抗体验证示例











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